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熒光顯微鏡使用注意事項

常見問題

熒光顯微鏡是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體，使之受激發后而產生長波長的熒光，然后觀察。熒光顯微鏡廣泛應用于生物，醫學等領域。
（1）?熒光顯微鏡一般分為透射和落射式兩種類型。
a.?透射式：激發光來自被檢物體的下方，聚光鏡為暗視野聚光鏡，使激發光不進入物鏡，而使熒光進入物鏡。它在低倍情況下明亮，而高倍則暗，在油浸和調中時，較難操作，尤以低倍的照明范圍難于確定，但能得到很暗的視野背景。透射式不使用于非透明的被檢物體。
b.落射式：透射式目前幾乎被淘汰，新型的熒光顯微鏡多為落射式，光源來自被檢物體的上方，在光路中具有分光鏡，所以對透明和不透明的被檢物體都適用。由于物鏡起了聚光鏡的作用，不僅便于操作，而且從低倍到高倍，可以實現整個視場的均勻照明。

（2）?熒光鏡檢術的注意事項
a.?激發光長時間的照射，會發生熒光的衰減和淬滅現象，因此盡可能縮短觀察時間，暫時不觀察時，應用擋板遮蓋激發光。
b.?作油鏡觀察時，應用”無熒光油”。
c.?熒光幾乎都較弱，應在較暗的室內進行。
d.?電源最好裝穩壓器，否則電壓不穩不僅會降低汞燈的壽命，也會影響鏡檢的效果。

金相顯微鏡延長壽命的方法

常見問題

延長金相顯微鏡的使用壽命的方法：使用時顯微鏡時應注意以下幾點：(現以金相顯微鏡的使用方法為例作為說明)

1、條件許可情況下，建議您的試驗室應具備三防條件：防震(遠離震源)、防潮(使用空調、干燥器)、防塵(地面鋪上地板)；電源：220V±10%，50HZ；溫度：0°C—40°C。

2、亮度調整切忌忽大忽小，也不要過亮，影響燈泡的使用壽命，同時也有損視力。

3、所有(功能)切換，動作要輕，要到位。

4、關機時要將亮度調到最小。

5、調焦時注意不要使物鏡碰到試樣，以免劃傷物鏡。

6、當載物臺墊片圓孔中心的位置遠離物鏡中心位置時不要切換物鏡，以免劃傷物鏡。

7、非專業人員不要調整照明系統(燈絲位置燈)，以免影響成像質量。

8、更換鹵素燈時要注意高溫，以免灼傷；注意不要用手直接接觸鹵素燈的玻璃體。

9、關機不使用時，將物鏡通過調焦機構調整到最低狀態。

10、關機不使用時，不要立即該蓋防塵罩，待冷卻后再蓋，注意防火。以上幾點僅是一些應特別注意的地方。希望大家在使用過程中應小心加細心，如確實在使用金相顯微鏡時有遇到難題自己無法解決時，可立即電話聯系本叁諾公司尋找解決方法。

偏光顯微鏡常識

常見問題, 技術支持

偏光顯微鏡在光學顯微鏡的光學系統中插入了起偏振鏡和檢偏振器，用以檢查樣品的各向異性和雙折射性的顯微鏡。起偏振鏡和檢偏振鏡都是由偏光棱鏡或偏光板的尼科耳(nicol)棱鏡制成。前者安裝在光源與樣品之間，后者安裝在接物鏡與接目鏡之間或接目鏡之上。在生物樣品中，肌肉纖維、骨骼和牙齒等具有各向異性，淀粉粒、染色體和紡錘體等具有雙折射性，因此被用于組織細胞的化學研究。光源最好用單波長光線。由于生物樣品比金相、巖石或結晶的雙折射性顯著微弱，所以有時也借敏感的檢偏振板造成的相加相減現象而利用其干涉色。

偏光顯微鏡：http://www.mingliupm.com/old_version/industry/pianguang/

偏振光的基礎知識

一、自然光和偏振光

光是一種電磁波，屬于橫波(振動方向與傳播方向垂直)。一切實際的光源，如日光、燭光、日光燈及鎢絲燈發出的光都叫自然光。這些光都是大量原子、分子發光的總和。雖然某一個原子或分子在某一瞬間發出的電磁波振動方向一致，但各個原子和分子發出的振動方向也不同，這種變化頻率極快，因此，自然光是各個原子或分子發光的總和，可認為其電磁波的振動在各個方向上的幾率相等。

自然光在窗過某些物質，經過反射、折射、吸收后，電磁波的振動波以被限制在一個方向上，其他方向振動的電磁波被大大削弱或消除。這種在某個確定方向上振動的光稱為偏振光。偏振光的振動方向與光波傳播方向所構成的平面稱為振動面。

二、直線偏振光、圓偏振光及橢圓偏振光

1.直線偏振光

直線偏振光由于光線的振動方向都在同一個平面內，所以這偏振光又叫作平面偏振光正對光的傳播方向看去，這種光的振動方向是一條直線，因此又叫直線偏振光或線偏振光。

2.圓偏振光和橢圓偏振光

(1)光的雙折射現象和晶體的光軸

當一束光線射入各向異性的晶體中時要分裂為兩束沿不同方向傳播的挑線，這種現象叫雙折射現象發生雙折射的兩束光線都是偏振光。這兩束光線之一恒遵守光的折射定律，在改變入射方向時傳播速度不發生變化，這條光線稱為尋常光線，用o表示;另一束光線不遵守折射定律，當入射光線方向變化時，它的傳播速度也隨之變化，光的折射率不同，這束光稱為非常光用e來表示。

在各向異性晶體中，存在有某些特殊方向，在這些方向上不發生雙折射，尋常光線和非常光線傳播方向和傳播速度相同，這些方向稱為]晶體的光軸有一個光軸的晶體叫一軸晶，有兩個光軸的晶體叫二軸晶。對于二軸晶，雙折射后的兩束光線均為非常為光線。

(2)波晶片

波晶片簡稱波片，可用來改變或檢驗光的偏振情況。當自然光沿一軸晶光軸入射時，不發生雙折射現象。如果垂直于晶體光軸入射時產生的o光和e光仍沿原入射方向傳播，但傳播速度和折射率不同，且傳播速度相差最大。如果在平行于一軸晶光軸方向上切下一薄片，這時晶片表面與光軸平持，這樣制得的晶片叫]波晶片當偏振光垂直于波片光軸入射時，在波片內形成傳播方向相同但傳播速度不同的o光和e光。

如果波片越厚，o光和e光線波波長的整數倍，這種波片叫全波片。依此類推，還有半波片和1/4波片等等。

(3)圓偏振光和橢圓偏振光的形成

一束自然光以垂直于一軸晶的光軸方向入射所產生的振動面互相垂直的兩束偏振光是不相干的。因為自然光是由光源中的不同分子和原子產生的，沒有固定的位相差，所以不發生干涉。但是當一束單色偏振光通過雙折射物質[/url]后，所產生的兩束偏振光是可以相干的。相當于兩個互相垂直的同周期的振動的合成。

當一束偏振光垂直于一軸晶光軸入射時產生兩束偏振光(o光和e光)。由于o光和e光的相位差不同而合成為直線偏振光、]圓偏振光橢圓偏振光。O光和e光的相位差由兩束光在晶片中折射率和晶片的厚度決定。設No、Ne分別為o光和e光的折射率，d為晶片的厚度，所產生的相位差為Δφ。則。改變晶片的厚度可得不同相位差的o光和e光。當Δφ為π/2的偶數倍時可產生直線偏振光;當Δφ為π/2的奇數倍時，可產生圓偏振光;當Δφ不是π/2的整數倍時均可產生橢圓偏振光。圓偏振光的振動端點在光的傳播方向上投影為一個圓，橢圓偏振光的振動端點在光的傳播方向上投影為一個橢圓。圓偏振光和橢圓偏振光在每一瞬間只有一個振動方向，所以仍屬偏振光。

特殊顯微鏡的應用

常見問題

1．熒光顯微鏡（fluorescencemicroscope）是用來觀察標本中的自發熒光物質或以熒光素染色或標記的細胞和結構。熒光顯微鏡是以高壓汞燈產生的短波紫外線為光源，并配有激發、阻斷、吸熱和吸收紫外線等濾片系統，標本中的熒光物質在紫外線激發下產生各種顏色的熒光，借以研究該熒光物質在細胞和組織內的分布。組織中的自發性熒光物質如神經細胞和心肌細胞等內的脂褐素呈棕黃色熒光，肝貯脂細胞和視網膜色素上皮細胞內的維生素A呈綠色熒光，某些神經內分泌細胞和神經纖維內的單胺類物質（兒茶酚胺、5－羥色胺、組胺等）在甲醛作用下呈不同顏色的熒光，組織內含有的奎寧、四環素等藥物也呈現一定的熒光。細胞內的某些成分可與熒光素結合而顯熒光，如溴化乙錠與吖啶橙可與DNA綜合，進行細胞內DNA含量測定。熒光顯微鏡更廣泛用于免疫細胞化學研究，即以異硫氰酸或羅丹明等熒光素標記抗體（一抗或二抗），用該標記抗體直接或間接地與細胞內的相應抗原結合，以檢測該抗原的存在與分布。

熒光顯微鏡：http://www.mingliupm.com/old_version/life/yingguang/

2．相差顯微鏡（phasecontrastmicroscope）是用于觀察組織培養中活細胞形態結構的?；罴毎麩o色透明，一般光鏡下不易分辨細胞輪廓及其結構。相差顯微鏡的特點是將活細胞不同厚度及細胞內各種結構對光產生的不同折射作用，轉換為光密度差異（明暗差），使鏡下結構反差明顯，影像清楚。組織培養研究常用的是倒置相差顯微鏡（invertedphasecontrastmicroscope），它的光源和聚光器在載物臺的上方，物鏡在載物臺的下方，便于觀察貼附在培養器皿底壁上的活細胞。

3．暗視野顯微鏡（dark-fieldmicroscope）主要用于觀察因反差或分辨力不足的微小顆粒。此種顯微鏡主要是有一個暗視野集光器，使光線不直接進入物境，故呈暗視野。而標本內的小顆粒產生的衍射光或散射光進入物鏡，暗視野中的顆粒呈明亮小點，如同在暗室可見一束光線中的微小塵粒一般。普通通光鏡最大分辨率為0.2μm，暗視野顯微鏡則可分辨0.004～0.2μm的微粒，適用于觀察細胞內線粒體運動及標本中細菌等微粒的運動等。

4．共集激光掃描顯微鏡（confocallaserscanningmicroscope,CLSM）是近10年研制成的高光敏度、高分辨率的新型儀器。它以激光為光源，光束經聚焦后落在樣品（組織厚片或細胞）不同深度的微小一點，并作移動掃描，通過電信號彩色顯像，經過微機圖像分析系統進行二維和三維分析處理。CLSM可對細胞進行三維結構圖像分析，細胞內各種熒光標記物的微量分析，細胞內Ca2+、pH值等的動態分析測定，細胞的受體移動、膜電位變化、酶活性和物質轉運的測定，并以激光對細胞及其染色體進行切割、分離、篩選和克隆。因此，CLSM是一種高技術產品，可對細胞的多種功能進行全自動、高效、快速的微量定性和定量測定。

其他如偏光顯微鏡用于研究組織晶體物質及纖維等的光學性質，紫外光顯微鏡用于研究細胞內核酸的分布與定量等。

顯微鏡鑒定陶瓷

常見問題

早在好幾年前，有收藏家協會有發布過的《看圖識寶》圖冊，里面有52件各時期的文物，有部分陶器和陶瓷還配有微觀圖像。他們之所以配有顯微鏡下的微觀圖像，是為了宣傳和推廣科學的鑒定方法，希望廣大收藏愛好者能夠認識并正確運用顯微鏡來觀察文物的細部特征，如文物上的痕跡、紋理、紋飾、密度等，從而對文物的真偽做出正確判斷。以下 就古瓷的方向詳盡歸納用顯微鏡鑒別的根本依據。

鑒定陶瓷主要依據的理論基礎：

陶瓷之美，是因為在土胎胚上加了不同釉色及各種顏料繪成圖案，經高溫燒制后，形成多種顏色及有精美紋飾的器物。古人在用釉及彩料上做到精心研究，精益求精，因而產生了神奇效果，同時也留下了特殊的印記，形成了今天我們鑒賞鑒定要尋找的“根”。

主要依據就是古瓷的“根”提供了的三個方面的鑒賞鑒定方向：

一、陶瓷的先天性。器物燒成后，有特殊紋理。如青花瓷，若使用進口蘇麻離青料，其包下沉，有泛錫光或棕褐色結晶斑，為必然結果。蘇料源絕已久，今人仿不出真料效果。還有黑釉瓷，因配方奧秘，古黑釉瓷微觀，有自然形成花朵狀、魚鱗狀、網狀等特殊紋斑，難以仿制，

二、陶瓷的后天性?，F存古瓷，不管傳世或出土，幾百年間與外界水、土、酸、堿接觸受腐蝕，必然產生各種印記，如產生變色泡、破口泡片紋變粗，表層有腐蝕點、腐蝕斑塊、脫釉露胎等現象，這些老化痕跡不可仿制，因而也成為我們今天鑒定古瓷的“根”，這種微小的變化在人的肉眼下是很難被察覺的，而借助陶瓷鑒定專用便攜式數碼顯微鏡在40倍率左右就可清晰尋找到相應的證據。

三、“兩種根”在同一古瓷存在的情況也有：如清代粉彩瓷，當時嫩青料，藍料，用的是琺瑯彩，開小片，及嫩青料有細小銀灰色的魚子斑，屬先天性的“根”。而到現在，彩料上面有腐蝕斑色，這是以后形成的老化痕跡，成為后天性的“根”。還有明早期以前使用蘇麻離青料的青花瓷，結晶斑是先天性的根，有變色氣泡是后天性的根。

以上三方面僅是陶瓷鑒賞鑒定方法僅是應用便攜式顯微鏡鑒定的一點滴總結。而對陶瓷“真不真，老不老”的問題，本是長期困擾著廣大古陶瓷收藏愛好者，且現在無論從出版的有關鑒定類書籍，還是培訓班上老師講授的“五看”，即看器型、看紋飾、看款識、看釉彩、看工藝，可這些傳統的鑒定方法，早已被現代技藝熟諳的仿古者所掌握，許多仿古作品惟妙惟肖，連專家也經?？醋哐?，從而借助顯微鏡這種現代工具是收藏愛好者與專家學者們的必然選擇，學習與不斷總結經驗是避免掏取高昂“學費”的方法。

顯微鏡觀察鑒別纖維

常見問題

根據纖維的什么形態,看纖維的一般外觀,視頻顯微鏡,檢測顯微鏡,體視顯微鏡都可以看得清楚,但看纖維切片的話,用生物顯微鏡才能更好的看清楚些,要求不同,需求不同。利用顯微鏡觀察纖維的縱向和截面形態特征來鑒別各種纖維，是廣泛采用的一種方法。

它既能單一成分的纖維，也可以用于多種成分混合而成的混紡產品的鑒別。天然纖維有其獨特的形態特征，如棉纖維的天然轉曲，羊毛的鱗片，麻纖維的橫節豎紋，蠶絲的三角形截面等，用生物顯微鏡能正確地辨認出來。

檢測化妝品內石棉含量的方法

常見問題

近年來，隨著經濟的不斷發展，化妝品工業也獲得了更大的發展空間，而化妝品安全也隨之成為了人們關注的重點問題。在化妝品生產過程中，經常需要使用如滑石、云母等礦物質作為輔料，而這些礦物的形成過程中常常會伴有石棉，比如閃石石棉就是滑石中較為常見的礦物。石棉與人的身體或者皮膚直接接觸，會對人體產生一定的危害，影響身體健康。隨著近年來化妝品行業的不斷發展，石棉問題也受到了更多的關注，在歐美以及日韓等國家都對進出口化妝品中的石棉含量進行了嚴格的規定，并且制定了相應的標準。我國在2009年制定了《粉狀化妝品及其原料中石棉測定方法》的暫行標準，為我國化妝品石棉檢測工作提供了參考和依據，同時也為提高化妝品品質提供了基本的保障。本文就主要針對化妝品中石棉含量的檢測方法進行簡單的分析。

一、X-射線衍射法（XRD）

XRD的檢測原理主要是根據每種礦物都具有特殊的X-射線衍射數據這一特性而進行檢測的，不同礦物的衍射峰的強度與其含量有著一定的比例關系，因此可以以此為依據對某物質中是否含有石棉以及其含量進行測定。這種方法可以用來鑒別是否存在石棉，以及石棉的種類和數量。XRD具有五種度量分析的方法，較為常用的是K值和絕熱發。利用XRD檢測石棉用量較小，而且居于較好的重現性，檢測的速度也較快，尤其適用于對粉狀化妝品中的石棉進行檢測，該方法也是當前國內使用的較為普遍的一種方法。當然，在學術界對于XRD也存在著一定的之呢過以，有的學者認為XRD檢測法的靈敏度較低，檢出限過低，只能夠用來檢測石棉含量不低于1%的檢測。但是關于檢出限的問題，也是一個十分復雜的問題，對于檢出限的影響因素也很多，只要能夠對檢測因素進行有效的控制，便能夠實現對檢出限的有效控制，將其控制在低于1%的范圍內。目前，常用的提高XRD檢測靈敏度和分析精度的方法的主要途徑是提高光源功率、采用高強度的旋轉陽極X-射線發生器等。

二、光學顯微鏡法

1.偏光顯微鏡法（PLM）

每一種礦物中都含有獨特的礦物光性和形態特征，因此通過偏光顯微鏡的觀察，能夠對礦物中晶體的形狀產生不用的表現，通過這些不同的特征來對石棉進行判斷。在偏光顯微鏡下，不同的石棉也會呈現不同的狀態，如溫石棉為細長型的纖維形狀，而且呈現出黃綠色。閃石類石棉的折射率較高。利用PLM法能夠有效的實現對石棉種類的鑒別，能夠對直徑超過0.25μm的石棉進行鑒別，也是當前國際各國都廣泛使用的鑒別方法。從理論上說，PLM最大能夠達到1000倍的放大效果，但是在實際從操作中會受到操作人員以及其他因素的影響，所以通常使用的PLM倍數一般是在400～600左右。

2.相差顯微鏡法（PCM）

PCM原理是將透過標本的可見光的光程差變成振幅差，光線透過標本后發生折射，偏離了原來的光路，同時被延遲了1/4λ，如果再增加或減少1/4λ，則光程差變為1/2λ，兩束光合軸后干涉加強，振幅增大或減小，提高反差，從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見，這樣得以大幅提高檢測精度。因此，該方法是各國空氣中微量石棉檢測標準中廣泛采用的方。但PCM法不能準確辨別纖維種類，在濃度較大時，檢測精度會受到影響， NIOSH標準PCM適用于石棉纖維直徑大于0.25μm，但也有文獻認為PCM適用于石棉纖維長度大于5μm，長徑比大于3的石棉。

三、電子顯微鏡法

電子顯微鏡法的運用主要是利用成像原理，將其分為掃描電鏡法和投射電鏡法，其中投射電鏡的分辨率相比掃描電鏡更高。與光學顯微鏡相比，電子顯微鏡具有更大的放大倍數和更高的分辨率。電子顯微鏡是當前國內外使用較多的方法，尤其是針對大氣粉塵以及水中的石棉石檢測，其具有其他方法無法比擬的優勢。

四、紅外光譜法（IR）

IR從某些方面來說，與XRD具有一定的相似性，其主要是利用不用的礦物所特有的紅外吸收譜的特征來對礦物進行鑒別和分析，比如閃石的石棉一般在752-760cm1左右處有一特征吸收帶，其中青石棉藍閃石的吸收帶稍高，在777-786cm-1。該反應帶的反應較為靈敏，而且其強度與石棉的含量成澄碧，因此可以利用紅外光譜對石棉進行檢測。但是，紅外光譜法也存在弊端，其能夠判斷出是否含有石棉，但是對石棉的類型卻無法有效的區分，無法進行定量分析，因此，紅外光譜法一般都被用作輔助手段，很少單獨使用。關于紅外光譜法的先關標準較為缺乏。

五、差熱分析法（DTA）

DTA指的是在程序控溫條件下，對于測量物質和參照物的溫度差與溫度或者是時間的關系進行測定。比如蛇紋石類的石棉溫差特征是在750～800℃有吸熱的特征，而伴隨著這個吸熱谷的出現，就會出現一個放熱的高峰。不同的礦物中含有不同的成分，而且成分會隨著溫度的變化而出現規律的變化，進而引起DTA曲線的特征發生變化。

使用顯微鏡中常出現的錯誤

常見問題

1. 將顯微鏡放置在實驗室的水槽或窗戶邊，潮濕和灰塵都是顯微鏡的殺手，因放置的方式和地方選擇的不對，都會極大的縮短顯微鏡使用壽命。

2. 顯微鏡初學者對其基本的原理和構造了解甚少，粗暴的造作也會是顯微鏡易損的致命傷。如：經常搬動，取放時用力過猛，調焦時用力升降調焦系統，不能正確的調節焦距和瞳孔距等等。

10CA-SMUV 定倍定標圖像顯微鏡

3. 高倍鏡頭的工作距離通常都非常短，如操作不當也會損傷高倍鏡。如：有操作者用完100X油鏡頭時不擦干凈或不擦，都是不好的使用習慣。

4. 在轉換物鏡時，經常有操作者直接轉動物鏡頭，殊不知此操作會影響光軸的同軸和齊焦。正確使用方法是應轉動物鏡轉換器，得到想要的觀察物鏡。

5. 將聚光鏡或視場光欄開得過大或過小，還將其位置調整得過高或過低，都不能得到分辨率和銳利度最佳的顯微圖像。

顯微鏡的觀察方式

常見問題

一．明視野觀察
明視野鏡檢，廣泛應用于病理、檢驗，用于觀察被染色的切片，所有顯微鏡均能完成此功能。

二．暗視野觀察
暗視野實際是暗場照明發。它的特點和明視野不同，不直接觀察到照明的光線，而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線。因此，視場成為黑暗的背景，而被檢物體則呈現明亮的象。
暗視野的原理是根據光學上的丁道爾現象，微塵在強光直射通過的情況下，人眼不能觀察，這是因為強光繞射造成的。若把光線斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了體積，為人眼可見。
m..m 暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡。它的特點是不讓光束由下至上的通過被檢物體，而是將光線改變途徑，使其斜射向被檢物體，使照明光線不直接進入物鏡，利用被檢物體表面反射或衍射光形成的明亮圖象。暗視野觀察的分辨率遠高于明視野觀察，最高達0.02—0.004

二．暗視野觀察
暗視野實際是暗場照明發。它的特點和明視野不同，不直接觀察到照明的光線，而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線。因此，視場成為黑暗的背景，而被檢物體則呈現明亮的象。
暗視野的原理是根據光學上的丁道爾現象，微塵在強光直射通過的情況下，人眼不能觀察，這是因為強光繞射造成的。若把光線斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了體積，為人眼可見。
m..m 暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡。它的特點是不讓光束由下至上的通過被檢物體，而是將光線改變途徑，使其斜射向被檢物體，使照明光線不直接進入物鏡，利用被檢物體表面反射或衍射光形成的明亮圖象。暗視野觀察的分辨率遠高于明視野觀察，最高達0.02—0.004

三．相差鏡檢法
在光學顯微鏡的發展過程中，相差鏡檢術的發明成功，是近代顯微鏡技術中的重要成就。我們知道，人眼只能區分光波的波長（顏色）和振幅（亮度），對于無色通明的生物標本，當光線通過時，波長和振幅變化不大，在明場觀察時很難觀察到標本.
相差顯微鏡利用被檢物體的光程之差進行鏡檢，也就是有效地利用光的干涉現象，將人眼不可分辨的相位差變為可分辨的振幅差，即使是無色透明的物質也可成為清晰可見。這大大便利了活體細胞的觀察，因此相差鏡檢法廣泛應用于倒置顯微鏡。

相差顯微鏡的基本原理是，把透過標本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見。光線透過標本后發生折射，偏離了原來的光路，同時被延遲了1/4λ（波長），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變為1/2λ，兩束光合軸后干涉加強，振幅增大或減下，提高反差。在構造上，相差顯微鏡有不同于普通光學顯微鏡兩個特殊之處：
1. 環形光闌（annular diaphragm） 位于光源與聚光器之間，作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐，焦聚到標本上。
2. 相位板（annular phaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種：
1. A 相板：將直射光推遲1/4λ，兩組光波合軸后光波相加，振幅加大，標本結構比周圍介質更加變亮，形成亮反差（或稱負反差）。
2. B 相板：將衍射光推遲1/4λ，兩組光線合軸后光波相減，振幅變小，形成暗反差（或稱正反差），結構比周圍介質更加變暗

四．微分干涉稱鏡檢術
微分干涉鏡檢術出現于60年代，它不僅能觀察無色透明的物體，而且圖象呈現出浮雕壯的立體感，并具有相襯鏡檢術所不能達到的某些優點，觀察效果更為逼真。
原理；
微分干涉稱鏡檢術是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來分解光束。分裂出來的光束的振動方向相互垂直且強度相等，光束分別在距離很近的兩點上通過被檢物體，在相位上略有差別。由于兩光束的裂距極小，而不出現重影現象，使圖象呈現出立體的三維感覺。

DIC顯微鏡的物理原理完全不同于相差顯微鏡，技術設計要復雜得多。DIC利用的是偏振光，有四個特殊的光學組件：偏振器（polarizer）、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器（analyzer）。偏振器直接裝在聚光系統的前面，使光線發生線性偏振。在聚光器中則安裝了偌瑪斯斯棱鏡，即DIC棱鏡，此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光（x和y），二者成一小夾角。聚光器將兩束光調整成與顯微鏡光軸平行的方向。最初兩束光相位一致，在穿過標本相鄰的區域后，由于標本的厚度和折射率不同，引起了兩束光發生了光程差。在物鏡的后焦面處安裝了第二個偌瑪斯斯棱鏡，即DIC滑行器，它把兩束光波合并成一束。
這時兩束光的偏振面（x和y）仍然存在。最后光束穿過第二個偏振裝置，即檢偏器。在光束形成目鏡DIC影像之前，檢偏器與偏光器的方向成直角。檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振面的兩束光，從而使二者發生干涉。x和y波的光程差決定著透光的多少。光程差值為0時，沒有光穿過檢偏器；光程差值等于波長一半時，穿過的光達到最大值。于是在灰色的背景上，標本結構呈現出亮暗差。為了使影像的反差達到最佳狀態，可通過調節DIC滑行器的縱行微調來改變光程差，光程差可改變影像的亮度。調節DIC滑行器可使標本的細微結構呈現出正或負的投影形象，通常是一側亮，而另一側暗，這便造成了標本的人為三維立體感，類似大理石上的浮雕

五.偏光顯微鏡
偏光顯微鏡的特點
偏光顯微鏡是鑒定物質細微結構光學性質的一種顯微鏡。凡具有雙折射的物質，在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚，當然這些物質也可用染色發來進行觀察，但有些則不可能，而必須利用偏光顯微鏡。
偏光顯微鏡的特點，就是將普通改變為偏光進行鏡檢的方法，以鑒別某一物質是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異性）。
雙折射性是晶體的基本特性。因此，偏光顯微鏡被廣泛地應用在礦物，化學等領域。在生物學和植物學也有應用。

六.浮雕相襯顯微鏡
1975年，Robert Hoffman 博士發明
2002年，專利到期，各顯微鏡廠家紛紛推出采用以自己名義命名的RC技術產品
原理
斜射光照射到標本產生折射、衍射，光線通過物鏡光密度梯度調節器產生不同陰影，從而使透明標本表面產生明暗差異，增加觀察對比度
特點
提高未染色標本的可見性和對比度；
圖象顯示陰影或近似三維結構而不會產生光暈；
可檢測雙折射物質（巖石切片、水晶、骨頭） ；
可檢測玻璃,塑料等培養皿中的細胞,器官和組織；
聚光鏡的工作距離可以設計的更長；
RC物鏡也可用于明場,暗場和熒光觀察
七：熒光顯微鏡
熒光鏡檢術是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體，使之受激發后而產生長波長的熒光，然后觀察。